徠卡熒光顯微鏡的成像方式

徠卡熒光顯微鏡的成像方式

徠卡熒光顯微鏡是利用一定波長的光使樣品受到激發(fā)，產(chǎn)生不同顏色的熒光，以用來觀察和分辨樣品中某些物質(zhì)及其性質(zhì)的一種顯微鏡，它在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)中有著廣泛的用途。

徠卡熒光顯微鏡根據(jù)襯度形成的機(jī)制，對散射吸收像可以有兩種成像方式：

(一)明場成像法(BFI)，即只讓近軸區(qū)的透射電子柬通過物鏡光闌，形成亮背景上的暗圖形像。物鏡光闌的孔越小，明場像的襯度越大；(二)暗場成像法(DFI)，即只讓部分大角度的散射束或晶體的某衍射束通過物鏡光闌，而將透射束擋掉。這樣形成的是暗背景上的亮圖形像。這種暗場成像法可以提高圖像的襯度，是一種重要的成像方法。

徠卡熒光顯微鏡實(shí)現(xiàn)暗場成像的方法大致可分四種：(一)維持沿光軸垂直照明而移動物鏡光闌；(二)利用傾斜照明而取在光軸方向的散射束，這稱為中心暗場成像法(CDFI)；(三)采用中心擋束而有環(huán)形透光區(qū)的物鏡光闌；（四)用環(huán)形透光的聚光鏡光聞和中心圓孔形的物鏡光闌。這里*種方法zui簡便，但利用的是遠(yuǎn)袖區(qū)中的電子成像，故像差大，圖像質(zhì)量不會很好。第二法可避免上述缺點(diǎn)，但徠卡熒光顯微鏡的物鏡光闌接收到的只是一小部分散衍射電子，因此效率較低。又光闌的一側(cè)經(jīng)常受到大量電子轟擊，容易造成非對稱污染，從而影響圖像質(zhì)量。環(huán)形物鏡光閑在這方面有所改進(jìn)，但缺點(diǎn)是制作困難，且難以做到*軸對稱。鑒于對照明系統(tǒng)的要求相對放寬松，所以可采用zui后一個(gè)方案，在聚光鏡處加一個(gè)環(huán)形光闌，對樣品作空心柬照明。這種裝置的效果。它的圖像分辨率可與明場像的接近，而襯度又大大提高。

任何物質(zhì)的分子都是由原子組成的，原子又由原子核和核外電子組成。在一定的條件下，分子處于一定的能量狀態(tài)，分子的能量是由電子的能量Ee、原子核的振動能量Ek和分子的轉(zhuǎn)動能量EB組成，而且Ee＞Ek＞EB。

在室溫下分子處于zui低的能量狀態(tài)即單線基態(tài)，當(dāng)吸收光能以后，分子就產(chǎn)生能量的躍遷，由基態(tài)激發(fā)躍遷到*電子激發(fā)態(tài)或第二電子激發(fā)態(tài)。

備注：徠卡熒光顯微鏡的成像方式的部分文章由北京中儀光科科技有限公司編輯整理上傳。