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中儀談-熒光顯微鏡

更新時間:2011-12-06   點擊次數:2529次

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熒光顯微鏡是一種對能發熒光的物質,或經熒光色素染色后能發熒光的物質進行觀察的顯微鏡。它有如下特點:

1.它以紫外光或紫單色光激發標本的熒光。因紫外光是不可見光,故由標本發出的熒光與背景反差很大。熒光顯微鏡通常是在黑暗的背景下觀察彩色圖像的,而普通顯微鏡是在亮的背景下觀察較暗的樣品的c熒光顯微鏡的對比度約為普通顯微鏡的100倍,因此可觀察到用普通顯微鏡看不到的結構和細節。

2.用肉眼或普通顯微鏡觀察經熒光色素染色的樣品對,只可看到整個標本僅以同一顏色著色。而用熒光顯微鏡觀察時,標本會發出染色色素*的熒光.呈現出標本的彩色圖像,易于鑒別,可減輕眼睛的疲勞。

3.用熒光色索染色,方法簡單,制作標本容易.有利于快速工作。

4.用于染色的熒光色素只要很低的濃度(如1:100000)就能發出明亮的熒光,一般對機體無毒,故有利于活體觀察,如研究功能器官的變化過程和細微結構.某些代謝過程的變化等等。

5.利用熒光還有助于分析物質的化學成分。例如,組織中有些重要成分能與藥物起作用而發熒光,據此可鑒定它們的存在或定位。

熒光顯微鏡裝置由發出強紫外線的光源、可提供一定波長范圍激發光的激勵濾光片、適于觀察熒光圖像的顯微鏡和提供相應波長范圍熒光的截止濾光片4個部分組成。透射型熒光顯微鏡和落射型熒光顯微鏡的光學系統分別如圖3—28(a)和圖3—28(b)所示。

日前世界各國已生產出有各種特色的熒光顯微鏡。按照照明裝置和觀察顯微鏡之間的聯結方式可分為分離型照明裝置、配裝閉合型照明裝置、內裝固定照明型顯微鏡3種類型。

在分離型中,照明裝置與顯微鏡分開,可獨立配置,如配合手持顯微鏡使用截止濾光片可直接觀察熒光。該型制造簡便,價格低,但若不小心碰撞,容易使光軸不重合,造成偏位,調整較困難,而刀在照明裝置與顯微鏡之間易有紫外線泄漏至光路之外。用于熒光抗體法時,若亮度不充分,光軸的少量偏位就會妨害觀察,使用時應格外注意。

配裝閉合型中,顯微鏡裝置在照明裝置的底座上,顯微鏡固定于底座,所以比分離型易調整光軸,穩定性好。但其靈活性差,不使用于手持顯微鏡。該型的照明裝置配用同一廠生產的顯微鏡才能發揮*效能。另一優點是比分離型紫外漏光少,如配用普通標準型顯微鏡,裝上截止濾光片,也可用于熒光觀察,且這樣組合的裝置價格較便宜。

內裝固定型是將光源、照明光學系統、各種濾光板及觀察顯微鏡組成—體,裝于堅固的鏡體中,是的熒光顯微鏡,其光軸更合完善,調整時不必擔心偏位,而巳激勵光的漏光極少。它是熒光觀察中zui適用的顯微鏡,但價格較高。

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